Luego lo centrifugamos a 130 revoluciónes durante 5 minutos para que las células se asienten abajo.
La semana que viene volveremos a actualizar el Blog!
Hasta entonces...
La fórmula para determinar el error consiste en lo siguiente:
(SD/raíz(n)/media . VC.100
Donde SD es el Desvio Standard, VC es el Valor de Confianza de 1.895 para un n=8 donde n es el número de recuentos.
Reemplazando los valores en los respectivos lugares se obtuvo un error del 9.12176%, por lo que se procedió correctamente.
- de 0 a 10 = 0También se puede apreciar que los Cometas de Valor 1 son la gran mayoría (con un 50% del total de los cometas medidos), siguiéndoles los Cometas de Valor 0 y 3 (con un 11,11 % en ambos casos). No fueron registrados Cometas de Valor 4.
Cabe destacar que las células fueron cultivadas con una concentración de HCB de 10μg/ml.
Para finalizar el día, fuimos con Gabriela a ver otro proyecto suyo que implementa el uso de cangrejos en un criadero especifico para ellos.
Volveremos a actualizar la semana entrante.
Lucas Toiw y Uriel Frid
* Descartar el sobrenadante (medio de cultivo) implementando el uso de la pipeta pasteur
* Lavar las células con 10 ml de buffer Fosfato de Potasio 0.134 M pH 6.5 conteniendo inhibidores de proteasas * Centrifugar 15 min a 7000 rpm (misma centrifuga)
* Descartar el sobrenadante (pipeta pasteur) y recoger las células resuspendiéndolas en el menor volumen posible de buffer con inhibidores ( debe quedar espeso) en un tubo apropiado para sonicar ( eppendorf o tubos centrifuga sorvall)
* Sonicar en sonicador de tip (a la maxima potencia que permita el aparato y el tip) 7 veces por 15 segundos cada vez (con el tip en un vaso de precipitados lleno de hielo y dejando enfriar entre los pulsos). Cabe destacar que el volumen a sonicar no debe sobrepasar la mitad del tubo utilizado, sino este podria romperse ya que el sonicador provoca energia intensa liberada en forma calorica.
Esta semana trabajamos con dos situaciones diferentes:
En la primera parte procedimos a trabajar con Gabriela Chaufan acompañada por Isis, estudiante de segundo año de Biología.
Primero fuimos a un laboratorio equipado para trabajar con cultivos de células. Allí, luego de sacar de la estufa el preparado, observamos el crecimiento de hepatocitos humanos en microscopio invertido.
Luego, una vez que Isis y Gabriela iniciaron cultivos con 300000 células sometidas a diferentes concentraciones de hexaclorobenceno (HCB), realizamos el recuento en cámara de Neubauer.
Previo a eso, realizamos una curva del crecimiento de los hepatocitos en base a recuentos obtuvidos previamente
En una segunda etapa, acompañados por Ángela Juarez, conocimos un laboratorio completamente dedicado al cultivo de microalgas.
Mas tarde preparamos 1,2 litros de BBM suplementado con glucosa.
El BBM es un medio de cultivo para el crecimiento de microalgas verdes compuesto por:
1) NaNO3 ................................................ 10g/400 ml agua bidestilada
2) KH2PO4 ................................................ 7g/400 ml agua bidestilada
3) K2HPO4 ................................................ 3g/400 ml agua bidestilada
4) MgSO4 .7H2O ......................................... 3g/400 ml agua bidestilada
5) CaCl2 .2H2O ......................................... 1g/400 ml agua bidestilada
6) NaCl ............................................... 1g/400 ml agua bidestilada
Las algas que vamos a sembrar dentro de dos semanas son Chlorella kessleri y Scenedesmus acutus
Para la preparación del medio de cultivo contábamos con soluciones stock concentradas de manera tal de utilizar 10ml de solución por cada litro de BBM.
Realizamos cálculos necesarios para preparar 1,2 litros.
El medio de cultivo BBM se suplementó con 1g de glucosa por litro.
Para atoclavar la solución, dividimos la misma en 4 erlenmeyers con 300 ml de solución. Éstos fueron tapados con tapones de algodón envueltos en aluminio.
La semana que viene volveremos a actualizar el Blog.
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