Semana IX - 10/07/08

Esta semana nos dedicamos a preparar muestras nuevamente para repetir el Ensayo de Electroforesis de Células Individuales (Ensayo Cometa).
Estuvimos trabajando con Gabriela Chaufan e Isis haciendo los pasos que la vez anterior no habiamos realizado. (Ver Semana V)
Primero Fuimos al cuarto de cultivo y resuspendimos con tripsina las células tratadas con distintas concentraciones de hexaclorobenceno y las colocamos en tubos para luego preparar los portaobjetos.
Luego, partiendo de portaobjetos ya cubiertos con una capa de agarosa de bajo punto de fusión, agregamos una capa muy delgada de las células anteriormente dichas, inmersas en agarosa de alto punto de fusión.
Una vez puesta la capa, es necesario dejarlo en hielo para acelerar la solidificación del agar.
Con el medio ya sólido, retiramos los cubreobjetos y así quedan listos los preparados.
La semana próxima repetiremos la corrida electroforética esperando nuevos resultados.

Actualizaremos nuevamente la semana que viene.

Uriel Frid
Lucas Toiw

Semana VIII - 03/07/08

Esta semana nos dedicamos a continuar con lo de la semana pasada, solo que esta vez con Chlorella kessleri.

Se procedió exactamente igual que la semana pasada, solo con una diferencia: cuando quisimos hacer el recuento en la cámara de Neubauer, la mezcla estaba muy concentrada (ya estaba en una dilución al 1/2) así que la volvimos a diluir al 1/2 una vez más, obteniendo así una dilución total al 1/4.




El método de recuento fue hecho con el mismo procedimiento que en el caso de Scenedesmus.


Finalmente, se pudo obtener una media de 900.5, un Desvio Starndard de 40.62723, con un n=8 y con un valor crítico de 1.895.


Luego usando la misma cuenta, sacamos el error:

SD/raíz(n)/media . VC.100

El error nos dio 3.23142%, por lo que esta más que bien.

Después de sacar el error hicimos el mismo razonamiento que la semana pasada para calcular el número de Células de Chlorella que hay en 1 ml de cultivo:

*Si en el sector que contamos hay un volumen de 0.1x10-3 ml y el promedio obtenido fue de 900.5 Células entonces en 1 ml hay 9005000 Células.

*Esas Células se encuentran en una dilución al 1/4, por lo que se debe multiplicar por cuatro la cantidad de Células. Entonces tenemos 36020000 Células/ml.

*Nosotros en realidad teníamos 0.5 ml de muestra mas 0.05 ml de Formol, osea 0.55 ml de muestra inicial, por lo que si en 1 ml de muestra hay 36020000 Células en 0.55 hay 19811000 Células.



*Entonces: si en 0.5 ml de cultivo hay 19811000 Células, en 1 ml hay 39622000 Células.



Como conclusión podemos decir que en 1 ml de cultivo de Chlorella kessleri hay 39622000 Células, es decir muchas más que las obtenidas en Scenedesmus.

Al ser Células mas chiquitas, tienen una tasa de división celular mayor, y debido a que las células de Chlorella y las de Scenedesmus estuvieron en incubación el mismo tiempo, las de Chlorella se pudieron multiplicar mas, y de ahí viene la necesidad de volver a diluir la muestra.

Hasta la semana que viene

Lucas Toiw

Uriel Frid

Semana VII - 27/06/08

Esta semana básicamente lo que se hizo fue un recuento de Células de Scenedesmus en cámara de Neubauer.

Se trabajo con 0.5 ml de la muestra con un agregado de 0.05 ml de Formol, lo que permitia que se conservara la misma.

Debido a que la muestra se encontraba muy concentrada, con agua destilada se procedió a una dilución al 1/2 obteniendo así un recuento mas fácil.

Luego de la dilución y con un microscopio cada uno, empezamos con el conteo.

El método de recuento de Células se basa en contar las mismas por cada cuadrante (B) en los cuadrantes grandes (A) (ver imágen). Luego se suman todas las Células por cuadrante (A). Se realizan tantos recuentos como sea necesario para lograr un error menor o igual al 10% (estimado de acuerdo con las ecuaciones que figuran más abjo) y se saca una media. Esta media nos sirve para calcular el número de células por mililitro de cultivo.

La fórmula para determinar el error consiste en lo siguiente:

(SD/raíz(n)/media . VC.100

Donde SD es el Desvio Standard, VC es el Valor de Confianza de 1.895 para un n=8 donde n es el número de recuentos.

Reemplazando los valores en los respectivos lugares se obtuvo un error del 9.12176%, por lo que se procedió correctamente.

Luego queríamos saber cuantas Células habían en la muestra inicial, por lo que razonamos lo siguiente:

*Si en el sector que contamos hay un volumen de 0.1x10-3 ml y el promedio obtenido fue de 339.625 Células entonces en 1 ml hay 3396250 Células.

*Esas Células se encuentran en una dilución al 1/2, por lo que se debe multiplicar por dos la cantidad de Células. Entonces tenemos 6792500 Células/ml.

*Nosotros en realidad teníamos 0.5 ml de muestra mas 0.05 ml de Formol, osea 0.55 ml de muestra inicial, por lo que si en 1 ml de muestra hay 6792500 Células en 0.55 hay 3735875 Células.

*Entonces: si en 0.5 ml de cultivo hay 3735875 Células, en 1 ml hay 7471750 Células.

Como conclusión podemos decir que en 1 ml de muestra de Scenedesmus hay 7471750 Células.

Debido a la falta de tiempo, la semana que viene realizaremos el recuento de Chlorella kessleri.

Hasta la semana que viene,

Lucas Toiw
Uriel Frid